背景:#EDF0F5 #FAFBE6 #FFF2E2 #FDE6E0 #F3FFE1 #DAFAF3 #EAEAEF 默認  
閱讀內容

酪氨酸含量的測定

[日期:2011-09-14] 來源:  作者:西貝生物 [字體: ]
    1、原理
    酪氨酸和1-亞硝酸-2-苯酚反應,生成有色化合物,此化合物在硝酸和亞硝酸鈉存在的條件下加熱,產生穩定的熒光物質,可用熒光法定量測定。
    2、試劑
    試劑均用分析純(AR.)
    A、亞硝基苯酚試劑
(1)1-亞硝基-2-苯酚乙醇溶液:稱取1-亞硝基-2-苯酚20mg,溶于100ml無水乙醇,于40℃保存。
(2)3mol/l硝酸溶液。
(3)0.1mol/l亞硝酸溶液。于40℃保存。
    臨用前將(1)(2)(3)三種溶液按2 :3 :3體積混合。
    B、標準酪氨酸溶液(7.2mg/L)
稱取l-酪氨酸溶液18.0mg,先加入數滴濃鹽酸,微熱完全溶解后,加水數10ml,用氫氧化鈉溶液中和至中性,定容至100ml,置冰箱中保存。臨用時吸取貯備液2ml,定容至50ml。
    3、測定
(1)制樣:稱取蘆薈或仙人掌1~5g,搗碎,以分析總糖或多糖時樣品處理方法脫脂去蛋白,制備好樣液后,定容至100ml,吸取樣液100~200uL加0.6mol/L三氯乙酸溶液混勻,4000r/min離心10min,吸取上清液用水精確稀釋5倍,即得稀釋10倍的樣品溶液。(加入三氯乙酸時已稀釋5倍)
(2)相品處理:分別吸取樣液100uL于具塞試管1;標準酪氨酸溶液25uL和0.06mol/L三氯乙酸溶液100uL于具塞試管2;0.06mol/L三氯乙酸溶液100uL于具塞試管3;各管用水補充容積至200uL。
    將各管置于55℃水浴數分鐘,加入新配制的亞硝基苯酚試劑0.3mL,搖勻,55℃保溫20min。保溫后加水2.5mL,搖勻后再加三氯乙烷溶液3mL。充分振搖,以便將多余的試劑抽提入二氯乙烷溶液中,4000r/min離心10min,將上層水溶液移至另一試管中,在180min內,于激發波長為468nm,發射波長為555nm處,測定樣品的熒光強度,與氨基酸標樣作對照(消除試劑空白熒光值),求出樣品氨基酸含量。
本法在0~0.2mol/L氨基酸范圍內呈良好的線性關系。
4、說明
(1)熒光物質的穩定性,從保溫完畢算起,相對熒光在180min內,平均減去2%左右。(2)酪氨的存在對熒光光度的測定存在干擾,色氨酸、色胺、苯丙氨酸、5-羥色氨酸、5-羥吲哚乙酸均有輕微的熒光值。
閱讀:

推薦 】 【 打印
上一篇:
下一篇:總皂甙的測定
內容查詢


福彩关于停售中福在线 今日大盘上证指数 dnf赌博幸运28的规则 青海体彩11任选5 河北十一选五基本走势图一定技巧 体彩快中彩玩法 9月15日股票推荐 一分彩直播app下载 贵州十一选五开奖结果果一定牛 重庆快乐十分开奖结果25期 河北十一选五下期预测推荐号