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蘆薈及仙人掌中總糖的測定

[日期:2011-09-14] 來源:  作者:西貝生物 [字體: ]

一、原理
糖與硫酸起反應,,脫水生成羥甲基呋喃甲醛(羥甲基糠醛),再與蒽酮縮合成藍色化合物,其呈色深淺與溶液中糖的濃度成正比。單糖,雙糖、糊精、淀粉等糖類都直接與試劑發生作用,因此不需經過水解。(如要求測定不包括糊精和淀粉的糖類,則預先將它們除去)。本法在于20~200mg/l含糖范圍內呈良好的線性關系。
二、儀器與試劑
1、儀器
(1)721分光光度計
(2)回流裝置
(3)可調溫電爐
(4)1000、100ml容量瓶
(5)0.1ml刻度吸管
(6)500ml分液漏斗
(7)65mm帶槽漏斗
(8)125mm中速濾紙
(9)10ml具塞試管
2、試劑:(1)蒽酮試劑:稱取0.2g蒽酮和1g硫脲(阻氧化劑)置于燒杯中,緩慢加入100ml濃硫酸,邊加邊攪拌,溶解后呈黃色透明溶液,將其貯存于棕色瓶中,最好現配現用,置冰箱中保存可存放2周。
(2)葡萄糖標準液:先配成1g/l的葡萄糖溶液,然后分別吸取1、2、4、6、8、10ml分別置于100ml容量瓶中,用水定容至刻度,可得10、20、40、60、80、100mg/l的葡萄糖系列濃度。
三、標準曲線的繪制
吸取含葡萄糖10、20、40、60、80、100mg/l標準液1ml分別置于試管中,分別加入蒸餾水1ml,沿壁加入5ml冷的蒽酮試劑,混勻,于試管上蓋上玻璃球,在沸水中加熱10min取出在流水中冷卻20min后,在620nm波長下,以試劑空白調零,測定各A620nm值,作標準曲線。
四、樣品步驟
1、總糖的提取與精制:稱取剪碎的蘆薈或仙人掌100g,經石油醚(60~90℃)500ml回流脫脂二次,每次2h,回收石油醚。再用80%的乙醚500ml浸泡過夜,回流提取二次,每次2h,過濾回收乙醚。將濾渣加蒸餾水3000ml,90℃提取1h,濾液濃縮至300ml,用氯仿多次萃取,(每次加氯仿200ml于分液漏斗 中,搖勻3min,放出濾層,回收氯仿。)以除去蛋白質,加活性炭1%脫色,過濾,沉淀物用乙醚多次洗滌,50℃干燥,即得蘆薈或仙人掌總糖。
2、樣品測定:吸取樣液1ml(含糖20~80mg/l),蒸餾水1ml,置于試管中,沿壁加入5ml冷的蒽酮試劑,混勻,于試管口蓋上玻璃球,在沸水中加熱10min,取出在流水中冷卻20min后,在620nm波長下,測定A620nm值,與曲線對照,求出樣品含糖總量。

五、說明
1、如提取液中存在較多可溶性蛋白質和色素,影響比色,可用氫氧化鋇作沉淀劑。
2、如要求測定結果不包括淀粉,應該用80%乙醇液作提取劑,以避免淀粉和糊精溶出。
3、蒽酮反應顏色的深淺隨溫度條件和加溫時間而變化,葡萄糖顯色高峰在100℃以下,加熱10min后出現,而核糖的顯色高峰在同樣溫度下,加熱3min后出現。因此,采用此法,控制反應條件很重要。

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